Реферат: Мезенхимальные стромальные клетки (МСК) признаны важнейшими регуляторами процессов репарации и регенерации поврежденных тканей. В нише МСК тесно контактируют с соседними клетками различных типов, в том числе и с эндотелиальными клетками (ЭК). С возрастом происходит постепенное истощение пула МСК и изменение их функционального состояния, в том числе и паракриного профиля, что, в свою очередь, может повлиять на тесно соседствующие с ними ЭК. В работе использовали линейные МСК (ASC52telo — ATCC® SCRC-4000™) и ЭК (EA.hy926 — ATCC® CRL2922™). Для достижения сенесцентного состояния МСК (МСК/МмС+) предварительно обрабатывали митомицином С (18 ч, 1.5 мкг/мл) (Sigma-Aldrich, США) и культивировали в течении 10 дней, статус «состаренных» клеток был подтвержден методически. Для выявления эффектов секретома МСК: в культуральную среду ЭК добавляли кондиционированную среду (КС) от МСК/ МмС± в соотношении 1:1. Время экспозиции — 48 часов. Анализ экспрессии молекул межклеточного взаимодействия VCAM-1, E-селектин, ICAM-1, интегрин α1, а также АФК оценивали с помощью проточной цитофлуориметрии. Содержание паракринных медиаторов в образцах КС определяли с помощью MILLIPLEX MAP (Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel — Premixed 48 Plex — Immunology Multiplex Assay) (Merck, Germany). Анализ экспрессии генов проводили с помощью ПЦР в реальном времени. Известно, что активация сенесцентного состояния приводит к увеличению размера клеток и гранулярности цитоплазмы. А необратимый арест клеточного цикла является главным признаком клеточного старения. Мы не обнаружили изменений вморфологии клеток. Однако отмечались изменения в клеточном приросте, ЭК культивируемые в КС от МСК/МмС+, достоверно менее активно пролиферировали (1,5 раза) (р<0,05), а уровень их окислительного стресса достоверно увеличивался (1,6 раза) (р<0,05). У ЭК культивируемых в КС от МСк/МмС+, увеличивалась экспрессия молекул ICAM-1. Экспрессия интегрина α1, VCAM-1, E-селектина не изменялась. Добавление КС от МСК/МмС+ к ЭК приводило к достоверному повышению концентрации: GM-CSF (7,7 раза), G-CSF (39 раз), GROa (2,7 раза), IL-6 (4,3 раза), IL-8 (1,2 раза), MCP-1 (1,3 раза), MCP-3 (7,6 раза), PDGF-AA (1,4 раза), RANTES (1,8 раза) (р<0,05). Транскрипционный анализ показал, что КС от МСК МмС+ снижала экспрессию в ЭК мРНК ITGА1(3 раза), MCP1 (1,7 раза) и повышала мРНК IL8 (17 раза) и IL6 (1,5 раза) (р<0,05). Уровень транскрипции ICAM1 и VCAM1 не изменялся. Полученные данные указывают на то, что сенесцентные МСК, являясь одним из элементов тканевой ниши, вносят свой вклад в модификацию свойств ЭК, что может повлечь за собой ряд последствий, в том числе повышение риска канцерогенеза, модуляции процессов ангиогенеза и др.

Библиографическая ссылка: Ездакова М.И. , Матвеева Д.К. , Ратушный А.Ю.
Роль сенесцентных мезенхимальных стромальных клеток в регуляции функциональной активности эндотелиальных клеток
Международный научный конгресс "CRISPR - 2023" 11-13 сент. 2023